toxreviewТоксикологический вестникToxicological Review0869-79223034-4611Federal Scientific Center of Hygiene named after F.F. Erisman10.36946/0869-7922-2017-1-35-41toxreview-294Research ArticleСтатьиЦИТОМНЫЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТОВ НЕСТАБИЛЬНОСТИ ГЕНОМА, ИНДУЦИРОВАННЫХ НАНОЧАСТИЦАМИ СЕРЕБРА РАЗНЫХ РАЗМЕРОВ НА КУЛЬТУРЕ ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКАCYTOME ANALYSIS OF EFFECTS OF GENOMIC INSTABILITY INDUCED BY DIFFERENTLY SIZED SILVER NANOPARTICLES IN HUMAN WHOLE BLOOD CULTUREИнгельФ. И.IngelF. I.

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории генетического мониторинга,

119121, Москва

119121, Moscow

fainaingel@mail.ruКривцоваЕ. К.KrivtsovaE. K.

научный сотрудник лаборатории генетического мониторинга,

119121, Москва

119121, Moscow

e_k_krivcova@mail.ruЮрцеваН. А.YurtsevaN. A.

ведущий инженер лаборатории генетического мониторинга,

119121, Москва

119121, Moscow

urtseva@mail.ruСавостиковаО. Н.SavostikivaO. N.

ведущий научный сотрудник лаборатории гигиены питьевого водоснабжения и санитарной охраны водоемов, кандидат медицинских наук,

119121, Москва

119121, Moscow

savon05@yandex.ruАлексееваА. В.AlekseevaA. V.

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории гигиены питьевого водоснабжения и санитарной охраны водоемов,

119121, Москва

119121, Moscow

al.anna@list.ruФГБУ «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им А.Н. Сысина» Минздрава РФРоссияA.N. Sysin Research Institute of Human Ecology and Environmental Health, of Ministry of Health of RussiaRussian Federation201728022017013541Copyright © Ингель Ф.И., Кривцова Е.К., Юрцева Н.А., Савостикова О.Н., Алексеева А.В., 20172017Ингель Ф.И., Кривцова Е.К., Юрцева Н.А., Савостикова О.Н., Алексеева А.В.Ingel F.I., Krivtsova E.K., Yurtseva N.A., Savostikiva O.N., Alekseeva A.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.toxreview.ru/jour/article/view/294

Высокая бактерицидная активность наночастиц серебра (НЧС) предполагает возможность их использования при подготовке питьевой воды. В данной работе на лимфоцитах периферической крови человека, культивированных в микроядерном тесте с цитохалазином В, изучены эффекты нестабильности генома в диапазоне концентраций 0,005-5,0 мг/л наночастиц серебра (НЧС) размером 14,3±0,2 нм (Ag14) и 100,0±11,0 нм (Ag100), стабилизированных аравийской камедью, и - для сравнения – в том же диапазоне концентраций Ag2 SO4 (ионов серебра). Все вещества суспендированы или растворены в питьевой воде.

Результаты показали, что НЧС обладают генотоксическим и цитотоксическим действием, что делает их непригодными для улучшения качества питьевой воды. Эффекты нестабильности генома, определенные по частоте делящихся клеток с микроядрами и нуклеоплазменными мостами, также как торможение митотической активности и снижение пролиферативной активности и увеличение продолжительности клеточного цикла уменьшались в ряду Ag2 SO4 >>Ag100>>Ag14. Однако повышение частоты асимметричных 3-ядерных клеток, обусловленное индукцией анеуплоидии, оказалось наиболее характерным для частиц Ag14. 

 

Статья в виде доклада была заслушана на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Актуальные гигиенические аспекты нанотоксикологии: теоретические основы, идентификация опасности для здоровья и пути ее снижения".

A high bactericidal activity of silver nanoparticles (NHS) suggests the possibility of their use in the preparation of drinking water. On the example of human peripheral blood lymphocytes cultured in micronucleus test with cytochalasin B, effects of genome instability were investigated in a concentration range of 0.005-5.0 mg / l of silver nanoparticles (NHS) with a size of 14.3 ± 0.2 nm (Ag14) and 100.0 ± 11.0 nm (AG100), stabilized with gum acacia and for comparison , those of Ag2SO4 (silver ions). In the same range of concentrations . All substances were suspended or dissolved in drinking water.The results showed that the NPS had genotoxic and cytotoxic effects that made them unsuitable to improve the quality of drinking water. Effects of genome instability determined by the frequency of dividing cells with micronuclei and nucleoplasmic bridges, as well as inhibition of mitotic activity, decrease of proliferative activity and increasing duration of the cell cycle came down in series of Ag2SO4 >> Ag100 >> Ag14. However, frequency rise of asymmetric 3-nucleated cells due to aneuploidy induction was the most characteristic of Ag14 particles. 

наночастицы серебрамикроядерный тест с цитохалазином Вклетки крови человеканестабильность геномаанеуплоидияsilver nanoparticlesmicronucleus test with cytochalasin Bhuman blood cellsgenome instabilityaneuploidyАвторы выражают искреннюю благодарность кандидату медицинских наук, старшему научному сотруднику лаборатории генетического мониторинга ФГБУ «НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Минздрава РФ В.В. Юрченко за внимательный анализ работы и ценные замечания.ReferencesAhamed M, Alsalhi MS, Siddiqui MK. Silver nanoparticle applications and human health.//Clin Chim Acta. 2010; v.411: 23- 24:1841-1848Ahamed m., Alsalhi m.s., siddiqui m.K. Silver nanoparticle applications and human health.//Clin Chim Acta. 2010, v.411, № 23-24:1841-1848de Jong W.h., borm p.J.A. Drug delivery and nanoparticles: application and hazards // Int J of Nanomedicine, 2008, v.3: 2:133- 149De Jong W.h., borm p.J.A. Drug delivery and nanoparticles: application and hazards // Int J of Nanomedicine, 2008, v.3, № 2:133-149Мосин О.В., Игнатов И. Методы получения мелкодисперстных наночастиц коллоидного серебра Интернет-журнал «НАУКОВЕДЕНИЕ» Выпуск 3, май – июнь 2014 http://naukovedenie.ru 85TVN314Mosin O. V., Ignatov And. Methods of receiving fine nanoparticles of colloidal silver the Internet magazine “NAUKOVEDENIYE” Release 3, May – June 2014 http:// naukovedenie.ru 85TVN314Xu L, Li X, Takemura T , Hanagata N , Wu G M S V, Chou LL Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel. //J Nanobiotechnology. 2012, v.10, № 1:16-18;Xu L , Li X , Takemura T , Hanagata N , Wu G M S V, Chou LL Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel. //J Nanobiotechnology. 2012, v.10, № 1:16-18;De Lima R, Seabra AB, Durán N. Silver nanoparticles: a brief review of cytotoxicity and genotoxicity of chemically and biogenically synthesized nanoparticles. J Appl Toxicol. 2012, Jun 13. doi: 10.1002/jat.2780;De Lima R, Seabra AB, Durán N. Silver nanoparticles: a brief review of cytotoxicity and genotoxicity of chemically and biogenically synthesized nanoparticles. J Appl Toxicol. 2012, Jun 13. doi: 10.1002/jat.2780;lansdown A.b.g. A Pharmacological and Toxicological Profile of Silver as an Antimicrobial Agent inMedical Devices. Review Article //Advances in Pharmacological Sciences, Volume 2010, Article ID 910686, doi:10.1155/2010/910686Lansdown A.B.G. A Pharmacological and Toxicological Profile of Silver as an Antimicrobial Agent inMedical Devices. Review Article //Advances in Pharmacological Sciences, Volume 2010, Article ID 910686, doi:10.1155/2010/910686Б.А.Кацнельсон, Л.И.Привалова, М.П.Сутункова, В.Б.Гурвич, И.А.Минигалиева, Н.В.Логинова, Е.П.Киреева, В.Я. Шур, Е.В.Шишкина, Я.Б.Бейкин, С.В.Пичугова, О.Г.Макеев, И.Е.Валамина. Основные результаты токсикологических экспериментов «ин виво» с некоторыми металлическими и метало-оксидными наночастицами Токсикологический вестник, 2015; 3: 26-40.Katsnelson B. A., Privalova L.I., Sutunkova M.P., Gurvich V.B., Minigaliyeva I.A., Loginova N. V., Kireev E.P., Schur W. Ja., Shishkina E.V., Beykin Ya.B., Pichugova S.V., Makeev O. G., Valamina I.E. The main results of toxicological experiments “in vivo” with some metal - oxidic nanoparticles. Toxicological vestnik, 2015 No. 3, S.26-40.Katsnelson b.A, Privalova L.I., Sutunkova M.P., Gurvich V.B., Loginova N.V., Minigalieva I.A., Kireyeva E.P., Shur V.Y., Shishkina E.V., Beikin Y.B., Makeyev O.H., Valamina I.E. Some inferences from in vivo experiments with metal and metal oxide nanoparticles: the pulmonary phagocytosis response, subchronic systemic toxicity and genotoxicity, regulatory proposals, searching for bioprotectors (a self-overview). Int J Nanomedicine. 2015 Apr 16;10: 3013- 29. doi: 10.2147/IJN.S80843.eCollection 2015.Katsnelson b.A, Privalova L.I., Sutunkova M.P., Gurvich V.B., Loginova N.V., Minigalieva I.A., Kireyeva E.P., Shur V.Y., Shishkina E.V., Beikin Y.B., Makeyev O.H., Valamina I.E. Some inferences from in vivo experiments with metal and metal oxide nanoparticles: the pulmonary phagocytosis response, subchronic systemic toxicity and genotoxicity, regulatory proposals, searching for bioprotectors (a self-overview). Int J Nanomedicine. 2015 Apr 16; 10:3013-29. doi: 10.2147/IJN.S80843. eCollection 2015.tomankova K., horakova J., harvanova m., malina l., soukupova J., hradilova s., Kejlova Kristina, Malohlava Libor Licman Jakub, Dvorakova Marketa, Jirova Dagmar, Kolarova H. Cytotoxicity, cell uptake and microscopic analysis of titanium dioxide and silver nanoparticles in vitro, Food and Chemical Toxicology (2015), doi: 10.1016/j.fct.2015.03.027Tomankova K., Horakova J., Harvanova M., Malina l., Soukupova J., Hradilova S., Kejlova Kristina, Malohlava Libor Licman Jakub, Dvorakova Marketa, Jirova Dagmar, Kolarova H. Cytotoxicity, cell uptake and microscopic analysis of titanium dioxide and silver nanoparticles in vitro, Food and Chemical Toxicology (2015), doi: 10.1016/j.fct.2015.03.027Thiago Verano-Braga, Rona MiethlingGraff, Katarzyna Wojdyla, Adelina RogowskaWrzesinska,Jonathan R. Brewer, Helmut Erdmann, and Frank Kjeldsen. Insights into the Cellular Response Triggered by Silver Nanoparticles Using Quantitative Proteomics. ACS NANO,• February 2014, www.acsnano. org. DOI: 10.1021/nn4050744Thiago Verano-Braga, Rona Miethling-Graff, Katarzyna Wojdyla, Adelina RogowskaWrzesinska,Jonathan R. Brewer, Helmut Erdmann, and Frank Kjeldsen. Insights into the Cellular Response Triggered by Silver Nanoparticles Using Quantitative Proteomics. ACS NANO,• February 2014, www.acsnano.org. DOI: 10.1021/nn4050744Hay RT (2005). “SUMO: a history of modification”. Mol. Cell 18 (1): 1–12. doi:10.1016/j.molcel.2005.03.012Hay RT (2005). “SUMO: a history of modification”. Mol. Cell 18 (1): 1–12. doi:10.1016/j.molcel.2005.03.012Asharani p. v., Kah Mun Grace Low ‡, Hande M. P., Valiyaveettil S. Cytotoxicity and Genotoxicity of Silver Nanoparticles in Human Cells //ACS Nano, 2009, 3 (2), pp 279–290Asharani p. v., Kah Mun Grace Low ‡, Hande M. P., Valiyaveettil S. Cytotoxicity and Genotoxicity of Silver Nanoparticles in Human Cells //ACS Nano, 2009, 3 (2), pp 279–290Xiu ZM, Zhang QB, Puppala HL, Colvin VL, Alvarez PJ. Negligible particle-specific antibacterial activity of silver nanoparticles. Nano Lett. 2012; 12 (8):4271-5. doi: 10.1021/nl301934w.Xiu ZM, Zhang QB, Puppala HL, Colvin VL, Alvarez PJ. Negligible particle-specific antibacterial activity of silver nanoparticles. Nano Lett. 2012; 12 (8):4271-5. doi: 10.1021/nl301934w.Kittler, S. C. G.; Gebauer, J. S.; Diendorf, J.; Treuel, L.; Ruiz, L.; Gonzalez-Calbet, J. M.; Vallet-Regi, M.; Zellner, R.; Köller, M. Epple, M. The Influence of Proteins on the Dispersability and Cell-Biological Activity of Silver Nanoparticles. J. Mater Chem. 2009, 20:512–518Kittler, S. C. G.; Gebauer, J. S.; Diendorf, J.; Treuel, L.; Ruiz, L.; Gonzalez-Calbet, J. M.; ValletRegi, M.; Zellner, R.; Köller, M. Epple, M. The Influence of Proteins on the Dispersability and Cell-Biological Activity of Silver Nanoparticles. J. Mater Chem. 2009, 20:512–518Chong-xin Huang, Bo Lv, and Yue Wang. Protein Phosphatase 2A Mediates Oxidative Stress Induced Apoptosis in Osteoblasts Mediators Inflamm. 2015; 804260. 10.1155/2015/804260Chong-xin Huang, Bo Lv, and Yue Wang. Protein Phosphatase 2A Mediates Oxidative Stress Induced Apoptosis in Osteoblasts Mediators Inflamm. 2015; 2015: 804260.10.1155/2015/804260Lim Hui Kheng, Asharani P. V., Prakash Hande M. Enhanced genotoxicity of silver nanoparticles in DNA repair deficient mammalian cells Frontiers in Genetics, 2012, v. 3, p.104. doi: 10.3389/ fgene.2012.00104Lim Hui Kheng, Asharani P. V., Prakash Hande M. Enhanced genotoxicity of silver nanoparticles in DNA repair deficient mammalian cells Frontiers in Genetics, 2012, v. 3, p.104. doi: 10.3389/fgene.2012.00104Vecchio G, Fenech M, Pompa PP, Voelcker NH. Lab-on-a-chip-based high-throughput screening of the genotoxicity of engineered nanomaterials. Small. 2014; 10 (13):2721- 34. doi: 10.1002/smll.201303359.Vecchio G, Fenech M, Pompa PP, Voelcker NH. Lab-on-a-chip-based high-throughput screening of the genotoxicity of engineered nanomaterials. Small. 2014; 10 (13):2721- 34. doi: 10.1002/smll.201303359.Спивак И.М. Действие алкилирующих агентов и ионизирующей радиации на клетки человека с наследственными нарушениями репарации ДНК. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Санкт-Петербург, 1998; 26.Spivak I.M. Action of the alkilating agents and ionizing radiation on human cells with hereditary violations of DNA reparation. Abstract of the thesis for degree of Candidate of Biology, St. Petersburg, 1998, S.26.McLuckie KI, Crookston RJ, Gaskell M, Farmer PB, Routledge MN, Martin EA, Brown K. Mutation spectra induced by alpha-acetoxytamoxifen-DNA adducts in human DNA repair proficient and deficient (xeroderma pigmentosum complementation group A) cells//Biochemistry. 2005 v.44., №22, P.8198-8205;19.McLuckie KI, Crookston RJ, Gaskell M, Farmer PB, Routledge MN, Martin EA, Brown K. Mutation spectra induced by alphaacetoxytamoxifen-DNA adducts in human DNA repair proficient and deficient (xeroderma pigmentosum complementation group A) cells//Biochemistry. 2005 v.44, № 22, P.8198-8205; 19.Kroes R, Galli C, Munro I, Schilter B, Tran L, Walker R, Würtzen G.Threshold of toxicological concern for chemical substances present in the diet: a practical tool for assessing the need for toxicity testing. Food Chem Toxicol. 2000, v.38, № 2-3:255-312Kroes R, Galli C, Munro I, Schilter B, Tran L, Walker R, Würtzen G.Threshold of toxicological concern for chemical substances present in the diet: a practical tool for assessing the need for toxicity testing. Food Chem Toxicol. 2000, v.38, № 2-3:255-312gonzalez l., sanderson b.J. s. and Kirsch-volders m. Adaptations of the in vitro MN assay for the genotoxicity assessment of nanomaterials [Journal] / Mutagenesis.- 2011. - 1 : Vol. 26:185-191.Gonzalez l., Sanderson B.J. S. and Kirsch-Volders M. Adaptations of the in vitro MN assay for the genotoxicity assessment of nanomaterials [Journal] / Mutagenesis - 2011.-1. Vol. 26:185-191.Ингель Ф.И., Гуськов А.С., Юрченко В.В., Кривцова Е.К., Юрцева Н.А. Показатели пролиферативной активности и их связь с генетическими повреждениями лимфоцитов крови при культивировании в условиях цитокинетического блока // Вестник РАМН, 2006; 4: 41-46.Ingel F.I., Guskov A.S., Yurchenko V. V., Krivtsov E.K., Yurtseva N. A. Indicators of proliferative activity and their correletions with genetic damages of lymphocytes of human blood cultivated in cytokinetic block//the Bulletin of the Russian Academy of Medical Science, 2006, No. 4:41-46.Ингель Ф.И. Перспективы использования микроядерного теста на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях цитокинетического блока. Часть 1. Пролиферация клеток. Экологическая генетика 2006б Т.IV, №3: 7-19Ingel F.I. Prospects of use of micronuclear test on human blood lymphocytes cultivated using cytokinetic block. Part 1. Proliferation of cages. Ecological genetics 2006,v. IV, No. 3: 7-19fenech m. Cytokinesis-block micronucleus assay evolves into a “cytome” assay of chromosomal instability, mitotic dysfunction and cell death //MutRes. -2006.- Vol.537, №7:127-132.Fenech M. Cytokinesis-block micronucleus assay evolves into a “cytome” assay of chromosomal instability, mitotic dysfunction and cell death //MutRes. - 2006.-Vol.537, №7:127-132.fenech m., chang W.p., Kirsch-volders m. et al. HUMN project: detailed description of the scoring criteria for the cytokinesis-block micronucleus assay using isolated human lymphocyte cultures //Mut Res, 2003. Vol. 534, P.65-75.Fenech M., Chang W.P., Kirsch-Volders M. et al. HUMN project: detailed description of the scoring criteria for the cytokinesis-block micronucleus assay using isolated human lymphocyte cultures //Mut Res, 2003. Vol. 534, P.65-75.gonzalez l., sanderson b.J. s. and Kirsch-volders m. Adaptations of the in vitro MN assay for the genotoxicity assessment of nanomaterials [Journal] / Mutagenesis. - 2011. - 1: Vol. 26:185-191.Gonzalez l., Sanderson B.J. S. and Kirsch-Volders M. Adaptations of the in vitro MN assay for the genotoxicity assessment of nanomaterials [Journal] / Mutagenesis. - 2011. - 1: Vol. 26:185-191.Statement on genotoxicity assessment of nanomaterials* and experimental considerations by committee on mutagenicity of chemicals in food, consumer products and the environment (com) http://www.iacom.org.uk/statements/documents/nanomaterialsfinal2012_000.pdfStatement on genotoxicity assessment of nanomaterials* and experimental considerations by committee on mutagenicity of chemicals in food, consumer products and the environment (com) http://www.iacom.org.uk/statements/documents/nanomaterialsfinal2012_000.pdfOECD guideline for the testing of chemicals. Proposal for updating Test Guideline 487. In Vitro Mammalian Cell Micronucleus Test. http://www.oecd.org/chemicalsafety/testing/50108793.pdfOECD guideline for the testing of chemicals. Proposal for updating Test Guideline 487. In Vitro Mammalian Cell Micronucleus Test. http://www.oecd.org/chemicalsafety/testing/50108793.pdfМошков Н. Е., Ингель Ф. И., Кривцов Г. Г. Морфометрия клеточных ядер для скрининга эффектов нестабильности генома в микроядерном тесте на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях цитокинетического блока // Нанотехнологии и охрана здоровья, 2012, Том IV, № 1 (10):24-32Moshkov N. E., Ingel F. I., Krivtsov G. G. A morphometry of cellular nuclei for screening of the effects of genomic instability in micronuclear test on human blood lymphocytes cultivated in cytokinetic block// Nanotechnology and health protection, 2012, v. IV, No. 1 (10):24-32ingel f., Zatsepina o., stekhin A., yakovleva g., savostikova o., Alekseeva A., iksаnova t. Electrochemically activated water induced effects of genomic instability in various living objects in vitro and in vivo. Central European Journal of Occupational and Environmental Medicine 2013, Vol. 1, Iss.7, 1:143 http://esciencecentral.org/journals/electrochemically-activated-tapwater-induced-effects-of-genomic-instabilityin-various-living-objects-in-vitro-and-invivo-2329-6879.1000143.php?aid=23292 http://dx.doi.org/10.4172/2329-6879.1000143Ingel f., Zatsepina O., Stekhin A., Yakovleva G., Savostikova O., Alekseeva A., Iksаnova T. Electrochemically activated water induced effects of genomic instability in various living objects in vitro and in vivo. Central European Journal of Occupational and Environmental Medicine 2013, Vol. 1, Iss.7, 1:143 http://esciencecentral.org/journals/electrochemicallyactivated-tap-water-induced-effects-ofgenomic-instability-in-various-living-objectsin-vitro-and-in-vivo-2329-6879.1000143.php?aid=23292 http://dx.doi.org/10.4172/2329-6879.1000143Кошелев К.К., Кошелева О.К., Паутов В.П., Горовенко В.И., Свистунов М.Г. Препараты коллоидных металлов КНД-М для медицины. Нанотехнология и охрана здоровья, 2010; 2: 36-38.Koshelev K.K., Kosheleva O.K., Pautov V.P., Gorovenko V. I., Svistunov M. G. Preparations of the KND-M colloidal metals for medicine. Nanotechnology and health protection, 2010, No. 2, S.36-38Smith LE, Nagar S, Kim GJ, Morgan WF. Radiation-induced genomic instability: radiation quality and dose response. Health Phys. 2003, Jul; 85(1):23-29.Smith LE, Nagar S, Kim GJ, Morgan WF. Radiation-induced genomic instability: radiation quality and dose response. Health Phys. 2003, Jul; 85 (1):23-29.Titenko-holland n., Jacob r. A., shang n., balaraman A., smith m. t. Micronuclei in lymphocytes and exfoliated buccal cells of postmenopausal women with dietary changes in folate. Mutat. Res., 1998. v. 417, N 2 – 3:101 –114.Titenko-Holland N., Jacob R. A., Shang N., Balaraman A., Smith M. T. Micronuclei in lymphocytes and exfoliated buccal cells of postmenopausal women with dietary changes in folate. Mutat. Res., 1998. v. 417, N 2 – 3:101 – 114.Тимошевский В.А., Назаренко С.А. Биологическая индикация мутагенных воздействий и генетической нестабильности у человека путем учета числовых хромосомных нарушений. Вестник ВОГИС, 2006; 10 (3): 530-540.Timoshevsky VA., Nazarenko S. A. Biologic indication of mutagenic influences and human genetic instability by the accounting of numerical chromosomal violations. Vestnic VOGIS, 2006, T.10, No. 3, S.530-540.Wise JP Sr, Goodale BC, Wise SS, Craig GA, Pongan AF, Walter RB, Thompson WD, Ng AK, Aboueissa AM, Mitani H, Spalding MJ, Mason MD. Silver nanospheres are cytotoxic and genotoxic to fish cells. Aquat Toxicol. 2010, v.97, № 1:34-41Wise JP Sr, Goodale BC, Wise SS, Craig GA, Pongan AF, Walter RB, Thompson WD, Ng AK, Aboueissa AM, Mitani H, Spalding MJ, Mason MD. Silver nanospheres are cytotoxic and genotoxic to fish cells. Aquat Toxicol. 2010, v.97, № 1:34-41.Healthcare of Russia, 119121, Moscow, Russian Federation

The authors declare that there are no conflicts of interest present.