toxreviewТоксикологический вестникToxicological Review0869-79223034-4611Federal Scientific Center of Hygiene named after F.F. Erisman10.47470/0869-7922-2023-31-5-297-303mugcwztoxreview-758Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESВлияние сезонности на некоторые показатели поведенческих тестов крысImpact of seasonality on certain parameters of behavioral testing in ratshttps://orcid.org/0000-0002-0097-7845МинигалиеваИльзира АмировнаMinigalievaIlzira A.

Доктор биологических наук, старший научный сотрудник ФБУН «ЕМНЦ ПОЗРПП» Роспотребнадзора, г. Екатеринбург.

e-mail: ilzira@ymrc.ru

Doctor of Biological Sciences, Senior Researcher, Head of the Department of Toxicology and Bioprophylaxis, Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers, 620014, Yekaterinburg, Russian Federation.

e-mail: ilzira@ymrc.ru

ilzira@ymrc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8284-0008ШабардинаЛада ВладимировнаShabardinaLada V.

Лаборант отдела токсикологии и биопрофилактики ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация.

e-mail: lada.shabardina@mail.ru

lada.shabardina@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2677-0479РябоваЮлия ВладимировнаRyabovaYuliya V.

Заведующий лабораторией научных основ биопрофилактики, ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация.

e-mail: ryabova@ymrc.ru

ryabova@ymrc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1743-7642СутунковаМарина ПетровнаSutunkovaMarina P.

Доктор медицинских наук, директор ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация.

e-mail: sutunkova@ymrc.ru

sutunkova@ymrc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1442-6737ПриваловаЛариса ИвановнаPrivalovaLarisa I.

Доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник отдела токсикологии и биопрофилактики, ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация.

e-mail: privalovali@yahoo.com

privalovali@yahoo.comhttps://orcid.org/0000-0001-8580-403XСоловьеваСветлана НиколаевнаSolovyevaSvetlana N.

Кандидат биологических наук, научный сотрудник, заведующий клиникой экспериментальных животных ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация. 

e-mail: solovyevasn@ymrc.ru

solovyevasn@ymrc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9871-9712БутаковаИнна ВладимировнаButakovaInna V.

Младший научный сотрудник НПО Клиники терапии и диагностики профессиональных заболеваний ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация.

e-mail: butakovaiv@ymrc.ru

butakovaiv@ymrc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0927-4062КлиноваСветлана ВладиславовнаKlinovaSvetlana V.

Кандидат биологических наук, заведующий лабораторией промышленной токсикологии, ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация.

e-mail: klinova.svetlana@gmail.com

klinova.svetlana@gmail.comhttps://orcid.org/0009-0005-0185-4053РомановаКсения ВитальевнаRomanovaKsenia V.

Лаборант отдела токсикологии и биопрофилактики ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 620014, г. Екатеринбург, Российская Федерация.

e-mail: romanovakv@ymrc.ru

romanovakv@ymrc.ruФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человекаРоссияFederal Budgetary Institution «Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers» of RospotrebnadzorRussian Federation202313112023315297303Copyright © Минигалиева И.А., Шабардина Л.В., Рябова Ю.В., Сутункова М.П., Привалова Л.И., Соловьева С.Н., Бутакова И.В., Клинова С.В., Романова К.В., 20232023Минигалиева И.А., Шабардина Л.В., Рябова Ю.В., Сутункова М.П., Привалова Л.И., Соловьева С.Н., Бутакова И.В., Клинова С.В., Романова К.В.Minigalieva I.A., Shabardina L.V., Ryabova Y.V., Sutunkova M.P., Privalova L.I., Solovyeva S.N., Butakova I.V., Klinova S.V., Romanova K.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.toxreview.ru/jour/article/view/758Введение

Введение. Влияние продолжительности светового дня (циркадного фотопериода) и сезонности на поведенческие реакции и физиологию человека и животных остается одним из важных вопросов современной науки.

Материал и методы

Материал и методы. Обобщены и проанализированы собственные данные, полученные от 289 контрольных животных в экспериментальных исследованиях, проведённых по 4 сезонам года: весна, лето, осень и зима. Для оценки поведения крыс выбрано 2 теста: метод «открытой площадки» (норковый рефлекс) и суммационно-пороговый показатель (СПП). Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с использованием методов статистического анализа в компьютерной программе MS Exсel 2016 с помощью t-критерия Стьюдента, p < 0,05. Наряду с этим был установлен процент отклонения изученных показателей от среднегодовых.

Результаты

Результаты. Установлено, что в группе крыс-самцов, находившихся при естественном освещении, максимальная поведенческая активность, оцененная по числу заглядываний в норки, наблюдалась весной и осенью. Минимальное значение уровня исследовательской активности у крыс-самцов было зафиксировано летом, причём этот показатель был статистически значимо снижен в сравнении с группами «весна» и «осень». Значения СПП были особенно высокими в зимний и летний период года, но снижались весной и в особенности осенью. Показатель СПП у крыс-самцов группы «весна» статистически значимо отличался от групп «осень» и «зима». У крыс-самок показатель «норковый рефлекс» в группе «весна» был статистически значимо повышен, в сравнении с данными всех сезонов года.

Ограничения исследования

Ограничения исследования. Был проведён анализ данных, полученных на базе клиники экспериментальных животных ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека за 7 лет (2015–2022 гг.).

Заключение

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что длина светового дня и сезонность способны оказывать влияние на результаты ряда поведенческих тестов, отражающих лабильность центральной нервной системы и исследовательскую активность животных. Результаты, полученные нами, могут послужить основой для методологической базы планирования токсикологического эксперимента с учётом сезонных колебаний физиологических параметров крыс.

Соблюдение этических стандартов. Исследование выполнено в соответствии с «International guiding principles for biomedical research involving animals» (the Council for International Organizations of Medical Sciences, the International Council For Laboratory Animal Science, 2012) («Международные руководящие принципы биомедицинских исследований с участием животных» (Совет международных организаций медицинских наук, Международный совет по лабораторным наукам о животных, 2012). Работа одобрена Локальным независимым этическим комитетом ФБУН «Екатеринбургский медицинский–научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Протокол № 2 от 20.04.2021.

Участие авторов

Участие авторов:Минигалиева И.А., Шабардина Л.В., Рябова Ю.В., Бутакова И.В. — концепция и дизайн исследования, написание текста;Соловьева С.Н. — концепция и дизайн исследования, проведение эксперимента, сбор и обработка материала, написание текста;Сутункова М.П., Привалова Л.И. — концепция и дизайн исследования;Клинова С.В. — концепция и дизайн исследования, проведение эксперимента, сбор и обработка материала;Романова К.В. — проведение эксперимента, сбор и обработка материала.Все соавторы — утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи.

Конфликт интересов

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов в связи с публикацией данной статьи.

Финансирование

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Поступила в редакцию

Поступила в редакцию: 25 мая 2023 / Принята к печати: 19 октября 2023 / Опубликована: 30 октября 2023

Introduction

Introduction. Effects of the daytime period (circadian photoperiod) and seasonality on behavioral reactions and physiology of humans and animals remains one of the important issues of modern science.

Material and methods

Material and methods. We have summarized our own data on control animals collected in experimental studies conducted in all seasons of the year. The hole-board test and summation threshold index were chosen to assess the behavior of rats. The data analysis was performed in Microsoft Excel 2016 using Student’s t-test, p<0.05. In addition, we estimated a percent deviation of the indicators under study from their annual averages.

Results

Results. We established that, as assessed by the number of head dips in the hole-board test, male rats kept at natural lighting demonstrated the most active exploratory behavior in spring and autumn while in summer, on the opposite, their exploration was statistically reduced. Values of the summation threshold index were the highest in winter and summer but lower in spring and especially in autumn. In springtime, the summation threshold index in male rats was statistically different from that observed in autumn and winter. In female rats, the index of the the hole-board test in spring was statistically significantly increased compared to data for all seasons of the year.

Limitations of the study

Limitations of the study. An analysis was carried out of the data obtained at the experimental animal clinic of the Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers for 7 years (2015–2022).

Conclusion

Conclusion. Our findings show that duration of the daytime period and seasonality can affect the results of some behavioral tests measuring lability of the central nervous system and exploratory activity of animals. They can contribute to the methodological basis for planning toxicity testing with account for seasonal fluctuations in physiological parameters of laboratory rodents.

Compliance with ethical standards. The study was carried out in accordance with the “International guiding principles for biomedical research involving animals” (the Council for International Organizations of Medical Sciences, the International Council For Laboratory Animal Science, 2012). The work was approved by the Local Independent Ethics Committee of the Federal Budgetary Institution «Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers» of Federal Service for Supervision in Protection of the Rights of Consumer and Man Wellbeing. protocol No. 2 of 04/20/2021.

Contribution of the authors:Minigalieva I.A., Shabardina L.V., Ryabova Yu.V., Butakova I.V. — study conception and design, writing text;Solovyeva S.N. — study conception and design, conducting an experiment, collection and processing of the material, writing text;Sutunkova M.P., Privalova L.I. — study conception and design;Klinova S.V. — study conception and design, conducting an experiment, collection and processing of the material;Romanova K.V. — conducting an experiment, collection and processing of the material.All co-authors — approval of the final version of the article, responsibility for the integrity of all parts of the article.

Conflict of interests

Conflict of interests. The authors declare no conflict of interest.

Funding

Funding. The study had no sponsorship.

Received

Received: May 25, 2023 / Accepted: October 19, 2023 / Published: October 30, 2023

поведенческие тестысезонностькрысыэкспериментальные данныеbehavioral testsseasonalityratsexperimental dataReferencesJameson A.N., Siemann J.K., Melchior J., Calipari E.S., McMahon D.G., Grueter B.A. Photoperiod impacts nucleus accumbens dopamine dynamics. eNeuro. 2023; 10(2): ENEURO.0361-22.2023. https://doi.org/10.1523/ENEURO.0361-22.2023Jameson A.N., Siemann J.K., Melchior J., Calipari E.S., McMahon D.G., Grueter B.A. Photoperiod impacts nucleus accumbens dopamine dynamics. eNeuro. 2023; 10(2): ENEURO.0361-22.2023. https://doi.org/10.1523/ENEURO.0361-22.2023Siemann J.K., Grueter B.A., McMahon D.G. Rhythms, reward, and blues: Consequences of circadian photoperiod on affective and reward circuit function. Neuroscience. 2021; 457: 220–34. https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2020.12.010Siemann J.K., Grueter B.A., McMahon D.G. Rhythms, reward, and blues: Consequences of circadian photoperiod on affective and reward circuit function. Neuroscience. 2021; 457: 220–34. https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2020.12.010Романчук Н.П., Пятин В.Ф. Мелатонин: нейрофизиологические и нейроэндокринные аспекты. Бюллетень науки и практики. 2019; 7: 176–96. https://doi.org/10.33619/2414-2948/44/08Romanchuk N.P., Pyatin V.F. Melatonin: Neurophysiological and neuroendocrine aspects. Byulleten’ nauki i praktiki. 2019; 5(7): 71–85. https://doi.org/10.33619/2414-2948/44/08 (in Russian)Siemann J.K., Williams P., Malik T.N., Jackson C.R., Green N.H., Emeson R.B., et al. Photoperiodic effects on monoamine signaling and gene expression throughout development in the serotonin and dopamine systems. Sci. Rep. 2020; 10(1): 15437. https://doi.org/10.1038/s41598-020-72263-5Siemann J.K., Williams P., Malik T.N., Jackson C.R., Green N.H., Emeson R.B., et al. Photoperiodic effects on monoamine signaling and gene expression throughout development in the serotonin and dopamine systems. Sci. Rep. 2020; 10(1): 15437. https://doi.org/10.1038/s41598-020-72263-5Otsuka T., Kawai M., Togo Y., Goda R., Kawase T., Matsuo H., et al. Photoperiodic responses of depression-like behavior, the brain serotonergic system, and peripheral metabolism in laboratory mice. Psychoneuroendocrinology. 2014; 40: 37–47. https://doi.org/10.1016/j.psyneuen.2013.10.013Otsuka T., Kawai M., Togo Y., Goda R., Kawase T., Matsuo H., et al. Photoperiodic responses of depression-like behavior, the brain serotonergic system, and peripheral metabolism in laboratory mice. Psychoneuroendocrinology. 2014; 40: 37–47. https://doi.org/10.1016/j.psyneuen.2013.10.013Munley K.M., Deyoe J.E., Ren C.C., Demas G.E. Melatonin mediates seasonal transitions in aggressive behavior and circulating androgen profiles in male Siberian hamsters. Horm. Behav. 2020; 117: 104608. https://doi.org/10.1016/j.yhbeh.2019.104608Munley K.M., Deyoe J.E., Ren C.C., Demas G.E. Melatonin mediates seasonal transitions in aggressive behavior and circulating androgen profiles in male Siberian hamsters. Horm. Behav. 2020; 117: 104608. https://doi.org/10.1016/j.yhbeh.2019.104608Munley K.M., Han Y., Lansing M.X., Demas G.E. Winter madness: Melatonin as a neuroendocrine regulator of seasonal aggression. J. Exp. Zool. A. Ecol. Integr. Physiol. 2022; 337(9–10): 873–89. https://doi.org/10.1002/jez.2601Munley K.M., Han Y., Lansing M.X., Demas G.E. Winter madness: Melatonin as a neuroendocrine regulator of seasonal aggression. J. Exp. Zool. A. Ecol. Integr. Physiol. 2022; 337(9–10): 873–89. https://doi.org/10.1002/jez.2601Green N.H., Jackson C.R., Iwamoto H., Tackenberg M.C., McMahon D.G. Photoperiod programs dorsal raphe serotonergic neurons and affective behaviors. Curr. Biol. 2015; 25(10): 1389–94. https://doi.org/10.1016/j.cub.2015.03.050Green N.H., Jackson C.R., Iwamoto H., Tackenberg M.C., McMahon D.G. Photoperiod programs dorsal raphe serotonergic neurons and affective behaviors. Curr. Biol. 2015; 25(10): 1389–94. https://doi.org/10.1016/j.cub.2015.03.050Скупневский С.В. Изучение хронотоксикологического профиля крыс в условиях сезонных биоритмов и световой депривации. В кн.: Материалы II Региональной междисциплинарной конференции молодых учёных «Наука – Обществу» 29 ноября 2012 г. Владикавказ: ФГБУН «Федеральный научный центр «Владикавказский научный центр» Российской академии наук»; 2013.Skupnevsky S.V. Study of the chronotoxicological profile of rats under conditions of seasonal biorhythms and light deprivation. In: Materials of the II Regional interdisciplinary conference of young scientists “Science for Society” November 29, 2012 [Materialy II Regional’noj mezhdisciplinarnoj konferencii molodyh uchyonyh «Nauka – Obshchestvu» 29 noyabrya 2012 g.]. Vladikavkaz: Federal State Budgetary Institution “Federal Scientific Center “Vladikavkaz Scientific Center” of the Russian Academy of Sciences”; 2013. (in Russian)Агаджанян Н.А., Башкирова А.А., Власова И.Г. О физиологических механизмах биологических ритмов. Успехи физиологических наук. 1987; 18(4): 80–99.Agadzhanyan N.A., Bashkirova A.A., Vlasova I.F. On the physiological mechanisms of biological rhythms. Uspekhi fiziologicheskikh nauk. 1987; 18(4): 80–99. (in Russian)Varpe Ø. Life history adaptations to seasonality. Integr. Comp. Biol. 2017; 57(5): 943–60. https://doi.org/10.1093/icb/icx123Varpe Ø. Life history adaptations to seasonality. Integr. Comp. Biol. 2017; 57(5): 943–60. https://doi.org/10.1093/icb/icx123Валеева Л.А., Годоражи О.Ю. Сезонные биоритмы коэффициента подвижности, ориентировочно-исследовательской активности и эмоциональной тревожности крыс. Медицинский вестник Башкортостана. 2009; 4(2): 186–8.Valeyeva L.A., Godorazhi O.Yu. Seasonal biorhythms of the coefficient of motion, pilot study activity and emotional anxiety in rats. Meditsinskiy vestnik Bashkortostana. 2009; 4(2): 186–8. (in Russian)Бессалова Е.Ю. Половые и сезонные отличия поведения крыс в «открытом поле». Свiт медицини та бiологiï. 2011; 1: 12–6.Bessalova Ye.Yu. Sexual and seasonal differences of rats’ behavior in the “open field”. Svet meditsiny v biologii. 2011; (1): 12–6. (in Russian)Батурин В.А. Взаимосвязь циркадного ритма двигательной активности с поведением крыс в открытом поле и У-образном лабиринте. Журнал высшей нервной деятельности. 1987; 37(3): 567–9.Baturin V.A. The relationship between the circadian rhythm of motor activity with the behavior of rats in an open field and a Y-shaped maze. Zhurnal vysshey nervnoy deyatel’nosti. 1987; 37(3): 567–9. (in Russian)Буслович С.Ю., Котеленец А.И., Фридлянд Р.М. Интегральный метод оценки поведения белых крыс в «открытом поле». Журнал высшей нервной деятельности. 1989; 39(1): 168–70.Buslovich S.Yu., Kotelenets A.I., Fridlyand R.M. An integral method for assessing the behavior of white rats in the “open field”. Zhurnal vysshey nervnoy deyatel’nosti. 1989; 39(1): 168–70. (in Russian)Маркель А.Л. К оценке основных характеристик поведения крыс в тесте открытого поля. Журнал высшей нервной деятельности. 1981; 31(2): 301–7.Markel A.L. On the evaluation of the main characteristics of the behavior of rats in the open field test. Zhurnal vysshey nervnoy deyatel’nosti. 1981; 31(2): 301–7. (in Russian)Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж. П. Методики и основы эксперимента по изучению мозга и поведения. М.: Высшая школа; 1991.Buresh Ya., Bureshova O., Houston J.P. Methods and Basics of the Experiment on the Study of Brain and Behavior [Metodiki i osnovy eksperimenta po izucheniyu mozga i povedeniya]. Moscow: Vysshaya Shkola Publ.; 1991. (in Russian)Нотова С.В., Казакова Н.Т., Маршинская О.В. Современные методы и оборудование для оценки поведения лабораторных животных (обзор). Животноводство и кормопроизводство. 2018; 101(1): 106–15.Notova S.V., Kazakova T.V., Marshinskaya O.V. Modern methods and equipment for assessing the behavior of laboratory animals (review). Zhivotnovodstvo i kormoproizvodstvo. 2018; 101(1): 106–15. (in Russian)Сперанский С.В. Определение суммационно-порогового показателя (СПП) при различных формах токсикологического эксперимента. Методические рекомендации. Новосибирск; 1975.Speransky S.V., ed. Determination of the Summation Threshold Index (STI) for Various Forms of Toxicological Experiment: Guidelines [Opredeleniye summatsionno-porogovogo pokazatelya (SPP) pri razlichnykh formakh toksikologicheskogo eksperimenta: Metodicheskie Rekomendatsii]. Novosibirsk; 1975. (in Russian)Юшков Б.Г, Корнева Е.А., Черешнев В.А. Понятие нормы в физиологии и патофизиологии. Физиологические константы лабораторных животных. Екатеринбург: УрО РАН; 2021.Yushkov B.B., Korneva E.A., Chereshnev V.A. The Concept of Norm in Physiology and Pathophysiology. Physiological Constants of Laboratory Animals [Ponyatiye normy v fiziologii i patofiziologii. Fiziologicheskiye konstanty laboratornykh zhivotnykh]. Yekaterinburg: UrO RAN Publ.; 2021. (in Russian)Wollnik F. Physiology and regulation of biological rhythms in laboratory animals: an overview. Lab. Anim. 1989; 23(2): 107–25. https://doi.org/10.1258/002367789780863538Wollnik F. Physiology and regulation of biological rhythms in laboratory animals: an overview. Lab. Anim. 1989; 23(2): 107–25. https://doi.org/10.1258/002367789780863538Илюха В.А., Виноградова И.А., Хижкин Е.А., Ильина Т.Н. и др. Влияние постоянного и естественного освещения на физиологическое состояние крыс. Принципы экологии. 2012; 1(1): 29–41.Ilyukha V.A., Vinogradova I.A., Khizhkin E.A., Ilyina T.N., et al. The influence of constant and natural lighting on the physiological state of rats. Principles of ecology. 2012; 1(1): 29–41. (in Russian)Sun L., Tang J., Liljenbäck H., Honkaniemi A., Virta J., Isojärvi J., et al. Seasonal variation in the brain μ-opioid receptor availability. J. Neurosci. 2021; 41(6): 1265–73. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.2380-20.2020Sun L., Tang J., Liljenbäck H., Honkaniemi A., Virta J., Isojärvi J., et al. Seasonal variation in the brain μ-opioid receptor availability. J. Neurosci. 2021; 41(6): 1265–73. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.2380-20.2020Meyza K.Z., Sotowska-Brochocka J. Photoperiod affects distribution of dynorphin A in the brain of Siberian hamster. Acta Neurobiologiae Experimentalis Journal. 2006; 66(3): 207–13.Meyza K.Z., Sotowska-Brochocka J. Photoperiod affects distribution of dynorphin A in the brain of Siberian hamster. Acta Neurobiologiae Experimentalis Journal. 2006; 66(3): 207–13.Oron L., Sarne Y., Michaelson D.M. Effect of opioid peptides on electrically evoked acetylcholine release from Torpedo electromotor neurons. Neuroscience Letters. 1991; 125(2): 231-4. https://doi.org/10.1016/0304-3940(91)90036-sOron L., Sarne Y., Michaelson D.M. Effect of opioid peptides on electrically evoked acetylcholine release from Torpedo electromotor neurons. Neuroscience Letters. 1991; 125(2): 231-4. https://doi.org/10.1016/0304-3940(91)90036-sLópez-Aumatell R., Martínez-Membrives E., Vicens-Costa E., Cañete T., Blázquez G., Mont-Cardona C., et al. Effects of environmental and physiological covariates on sex differences in unconditioned and conditioned anxiety and fear in a large sample of genetically heterogeneous (N/Nih-HS) rats. Behav. Brain Funct. 2011; 7: 48. https://doi.org/10.1186/1744-9081-7-48López-Aumatell R., Martínez-Membrives E., Vicens-Costa E., Cañete T., Blázquez G., Mont-Cardona C., et al. Effects of environmental and physiological covariates on sex differences in unconditioned and conditioned anxiety and fear in a large sample of genetically heterogeneous (N/Nih-HS) rats. Behav. Brain Funct. 2011; 7: 48. https://doi.org/10.1186/1744-9081-7-48Aguilar R., Gil L., Gray J.A., Driscoll P., Flint J., Dawson G.R., et al. Fearfulness and sex in F2 Roman rats: males display more fear though both sexes share the same fearfulness traits. Physiol. Behav. 2003; 78(4–5): 723–32. https://doi.org/10.1016/s0031-9384(03)00043-xAguilar R., Gil L., Gray J.A., Driscoll P., Flint J., Dawson G.R., et al. Fearfulness and sex in F2 Roman rats: males display more fear though both sexes share the same fearfulness traits. Physiol. Behav. 2003; 78(4–5): 723–32. https://doi.org/10.1016/s0031-9384(03)00043-x

The authors declare that there are no conflicts of interest present.