Конструирование иммуноферментной моноклональной тест-системы для выявления шигаподобных токсинов I и II типов

Введение. Целью работы являлось конструирование иммуноферментной моноклональной тест-системы для выявления шигаподобных токсинов I и II типов и оценка ее диагностических свойств. 

Материал и методы. В работе использованы гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела к шигаподобным токсинам I и II типов, полученные в филиале ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (г. Киров); мыши линии BALB/c; шигаподобные токсины I и II типов. Клетки гибридом культивировали в культуральных флаконах и в перитонеальной полости мышей линии BALB/с. Моноклональные антитела выделяли из асцитических жидкостей путем осаждения насыщенным раствором сульфата аммония с последующей очисткой ионообменной хроматографией. Полученные препараты моноклональных антител использовали для конструирования иммуноферментных тест-систем для выявления шигаподобных токсинов I и II типов. Специфические компоненты иммуноферментных тест-систем подвергали сублимационному высушиванию в защитной среде. 

Результаты и обсуждение. В результате проведённых исследований осуществлена наработка и очистка препаративных количеств моноклональных антител к шигаподобным токсинам I и II типов; проведен выбор моноклональных антител для сорбции на твёрдой фазе и для синтеза иммунопероксидазных конъюгатов. 

Заключение. сконструирована экспериментальная иммуноферментная тест-система, позволяющая в сэндвич-варианте иммуноферментного анализа выявлять шигаподобные токсины I и II типов в концентрации 1 нг/мл и более.

1. Мelton-Celsa A.R. Shiga toxin (Stx). Classification, structure, and Function. Microbiol Spectr. 2014; 2(2): 23. https://doi.org/10.1128/9781555818791.ch3

2. Joseph A., Cointe A., Mariani Kurkdjian P. Shiga Toxin-Associated hemolytic uremic syndrome: А narrative review. Toxins (Basel). 2020; 12: 67. https://doi.org/10.3390/toxins12020067

3. E. coli: Rapid Responce in a crisis. European Food Safety Authority. Available at: https://www.efsa.europa.eu/en/press/news/120711.

4. Онищенко Г.Г., Дятлов И.А., Светоч Н.В. Молекулярно-генетическая характеристика шига-токсинпродуцирующих Escherichia сoli, выделенных при вспышке пищевой инфекции в Санкт-Петербурге в 2013 году. Вестник РАМН. 2015; 1: 70-80

5. Gyles C.L. Shiga toxin-producing Escherichia coli: An overview. J. Anim. Sci. 2007; 85: 45-62.

6. Paletta A.C., Castro V.S., Conte-Junior C.A. Shiga toxin-producing and enteroaggregative Echerichia coli in animal, foods and humans: pathogenicity, mechanisms, detection methods, and epidemiology. Curr. Microbiol. 2019: 1-9. https://doi.org/10.1007/s00284-019-01842-1

7. Taylor М.С. Enterohaemorrhagic Escherichia coli and Shigella dysenteriae type 1-induced haemolytic uraemic syndrome. Pediatr. Nephrol. 2008; 23: 1425-31.

8. МУК 4.2.2963-11. Методические указания по лабораторной диагностике заболеваний, вызываемых Escherichia coli, продуцирующих шига-токсины (STEC-культуры) и обнаружению возбудителей STEC-инфекций в пищевых продуктах. Москва, 2011. https://www.docs.cntd.ru/document/1200094087

9. Laemmli U.K. Сleavage of structural proteins durimg the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227 (5259): 680-85.

10. Szewczak A.A., Moore P.B., Chan Y.L. The conformation of the sarcin/ricin loop from 28S ribosomal RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993; 90: 9581-85.

11. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 1951; 193(1): 265-75.

12. Д. Кэтти, ред. Антитела. Методы. Кн. 1. М.: Мир, 1991

13. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugated. J. Histochem. Cytochem. 1974; 22(12): 1084-91