Стандартизация критериев для интерпретации результатов оценки мутагенности в тесте Эймса

Введение. В настоящее время для обоснования заключения о наличии или отсутствии мутагенной активности в тесте Эймса используют различные комбинации критериев для интерпретации результатов. В некоторых случаях при наличии слабых эффектов, особенно при оценке мутагенности пестицидов-дженериков, которые могут содержать мутагенные примеси, возможны разные выводы, в зависимости от выбранных критериев.

Материал и методы. Для стандартизации критериев интерпретации результатов в тесте Эймса использованы данные, полученные ранее при оценке мутагенной активности технических продуктов пестицидов. Исследования проводили согласно стандартному протоколу ОЭСР № 471 и ГОСТ 32376–2013 методом прямого внесения на чашку и в условиях предварительной инкубации.

Результаты. Проведена оценка применимости трех комбинаций критериев интерпретации результатов теста Эймса с использованием ранее полученных собственных экспериментальных данных. Установлено, что в качестве критериев биологической значимости результатов оценки мутагенности в тесте Эймса целесообразно использовать не только консервативный подход, основанный на правиле кратности, но и проводить сопоставление с данными диапазонов исторического отрицательного лабораторного контроля.

Ограничение исследования. Исследование ограничено оценкой результатов экспериментов, полученных при использовании стандартного чашечного теста, но не теста во флуктуационном формате.

Заключение. Заключение о наличии мутагенной активности объекта испытания в тесте Эймса может быть сделано при условии удовлетворения следующих критериев: наличие статистически значимого увеличения числа ревертантов на опытных чашках по сравнению с сопутствующим отрицательным контролем; наличие зависимости «концентрация–эффект»; среднее число ревертантов как минимум для одной из тестируемых концентраций в условиях метаболической активации или без неё должно превышать верхнюю границу распределения исторического отрицательного лабораторного контроля; число ревертантных колоний на чашках с добавлением объекта испытаний должно в 2 или более раз превышать число спонтанных ревертантных колоний в отрицательном контроле для штаммов ТА97, ТА98, ТА100, ТА102 и в 3 или более раз для ТА1535; наличие воспроизводимых эффектов.

Соблюдение этических стандартов. Исследование не требует одобрения комитета по биомедицинской этике или других документов.

Участие авторов:
Егорова О.В. — концепция и дизайн исследования, сбор и анализ данных литературы, написание текста;
Илюшина Н.А. — концепция и дизайн исследования, написание текста.
Все соавторы — утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Поступила в редакцию: 21 июля 2024 / Принята в печать: 20 сентября 2024 / Опубликована: 30 октября 2023

1. Maron D., Ames B.N. Revised methods for the Salmonella mutagenicity test. Mutation Research. Environ. Mutagen. 1983; 113(3–4): 173–215. https://doi.org/10.1016/0165-1161(83)90010-9

2. Фонштейн Л.М., Абилев С.К., Бобринев Е.В. и др. Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей среды с помощью бактериальных тест-систем: методические указания. М.: 1985.

3. Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ. Совместное издание Программы ООН по окружающей среде, Международной организации труда и Всемирной организации здравоохранения. М.: Медицина; 1989.

4. Nicolette J., Dakoulas E., Pant K., et al. A comparison of 24 chemicals in the six-well bacterial reverse mutation assay to the standard 100-mm Petri plate bacterial reverse mutation assay in two laboratories. Regul. Toxicol. Pharmacol. 2018; 100: 134–60. https://doi.org/10.1016/j.yrtph.2018.10.005

5. Levy D.D., Zeiger E., Escobar P.A., et al. Recommended criteria for the evaluation of bacterial mutagenicity data (Ames test). Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 2019; (848): 403074. https://doi.org/10.1016/j.mrgentox.2019.07.004

6. Schoeny R., Cross K.P., DeMarini D.M., et al. Revisiting the bacterial mutagenicity assays: Report by a workgroup of the International Workshops on Genotoxicity Testing (IWGT). Mutation Research. Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 2020; 849: 503137. https://doi.org/10.1016/j.mrgentox.2020.503137

7. OECD, Test 471: 2020, IDT. Bacterial reverse mutation test.

8. Hamel A., Roy M., Proudlock R. The bacterial reverse mutation test. Chapter 4. In Genetic Toxicology Testing. A Laboratory Manual. 2016

9. Manual on development and use of FAO and WHO specifications for pesticides First edition – third revision March 2016. Available at: https://apps.who.int/iris/bitstream/10665/246192/1/WHO-HTM-NTD-WHOPES-2016.4-eng.pdf

10. Guidance Document on the Assessment of the Equivalence of Technical Materials of Substances regulated under Regulation (EC) No 1107/2009. SANCO/10597/2003–rev. 10.1, 13 July 2012. Available at: https://ec.europa.eu/food/sites/food/files/plant/docs/pesticides_guidance_equivalence-chem-substances_en.pdf

11. Илюшина Н.А. Оценка эквивалентности технических продуктов пестицидов-аналогов оригинальным действующим веществам по критерию «мутагенность». Экологическая генетика. 2019; 17(2): 101–12.

12. Overview of China’s new pesticide regulations. 2020. [Electronic resource]. URL: https://agrochemical.chemlinked.com/agropedia/overview-chinas-new-pesticide-regulations (дата обращения: 27.06.2024)

13. Илюшина Н.А., Егорова О.В., Ревазова Ю.А. Применимость теста Эймса и микроядерного теста in vivo для оценки эквивалентности технических продуктов пестицидов оригинальным действующим веществам. Гигиена и санитария. 2019; 98(2): 219–24.

14. Абилев С.К., Глазер В.М. Мутагенез с основами генотоксикологии: учебное пособие. М.; СПб.: Нестор-История; 2015: 304.

15. Kirkland D., Reeve L., Gatehouse D., Vanparys P. A core in vitro genotoxicity battery comprising the Ames test plus the in vitro micronucleus test is sufficient to detect rodent carcinogens and in vivo genotoxins. Mutat Res. 2011; 18; 721(1): 27–73. https://doi.org/10.1016/j.mrgentox.2010.12.015

16. Абилев С.К. Выявление и прогнозирование мутагенной активности химических соединений окружающей среды: автореф. дис. … д-ра биол. наук. М.: 2003.

17. Егорова О.В., Демидова Ю.В., Илюшина Н.А. Оценка экспериментальных условий, влияющих на уровень спонтанных мутаций штаммов Salmonella, используемых в тесте Эймса. Гигиена и санитария. 2021; 100(7): 736–43. https://doi.org/10.47470/0016-9900-2021-100-7-736-743